本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及用液相色譜法分離和測(cè)定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體的方法。
背景技術(shù)：
枸櫞酸馬羅匹坦(maropitantcitrate)，是一種1型神經(jīng)激肽(nk1)的受體拮抗劑，可通過(guò)抑制p物質(zhì)(引起嘔吐的關(guān)鍵性神經(jīng)遞質(zhì))而作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也可抑制外周及中樞性嘔吐；其化學(xué)結(jié)構(gòu)如式(1)所示：
枸櫞酸馬羅匹坦為手性藥物，有兩個(gè)手性中心，即其有1個(gè)對(duì)映異構(gòu)體及2個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體，共3個(gè)光學(xué)異構(gòu)體。該光學(xué)異構(gòu)體作為雜質(zhì)會(huì)影響枸櫞酸馬羅匹坦原料藥及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，為了保證藥物的安全性，因此在生產(chǎn)過(guò)程中需要對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。
目前，含手性碳原子的對(duì)映異構(gòu)體分離一直是手性藥物合成和制劑過(guò)程中質(zhì)量控制的難點(diǎn)，且《美國(guó)藥典》usp、《歐洲藥典》ep及《中國(guó)藥典》ch.p均沒(méi)有記載枸櫞酸馬羅匹坦對(duì)映異構(gòu)體及其光學(xué)異構(gòu)體的分析方法，也未檢索到有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體的分離檢測(cè)方法。
因此，發(fā)明一種分離和測(cè)定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體的方法顯得尤為重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
術(shù)語(yǔ)定義
在下文或下文的內(nèi)容中，無(wú)論是否使用“大約”或“約”等字眼，所有在此公開了的數(shù)字均為近似值。每一個(gè)數(shù)字的數(shù)值有可能會(huì)出現(xiàn)1％、2％、5％、7％、8％、或10％的差異。
發(fā)明詳述
為了更準(zhǔn)確的控制產(chǎn)品中光學(xué)異構(gòu)體的含量，保證原料藥以及制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)及研究，開發(fā)了適合于枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體含量測(cè)定的分析方法。本發(fā)明的方法能簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地分離、檢測(cè)出枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體，其分離度可達(dá)3.09-4.63。
本發(fā)明的目的在于提供一種用液相色譜法分離測(cè)定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，適用于枸櫞酸馬羅匹坦藥物合成和制劑過(guò)程中的質(zhì)量控制。
一種應(yīng)用液相色譜法分離測(cè)定枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體的方法，其特征在于，采用以多糖衍生物為填料的手性色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或以正庚烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液為流動(dòng)相。
在一些實(shí)施例中，所述手性色譜柱的多糖衍生物填料為直鏈淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、直鏈淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、直鏈淀粉-三[(s)-α-甲苯基氨基甲酸酯]、纖維素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纖維素-三[4-甲基苯甲酸酯]或其組合，在一些實(shí)施例中，多糖衍生物填料為直鏈淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)或纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。
在一些實(shí)施例中，所述的手性色譜柱為chiralpakie或chiralpakic,銷售廠家是大賽璐藥物手性技術(shù)(上海)有限公司，英文名daicelchiraltechnologies(china)co.,ltd。
在一些實(shí)施例中，所述流動(dòng)相中正己烷、異丙醇、甲醇與二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實(shí)施例中，所述流動(dòng)相中正庚烷、異丙醇、甲醇與二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
本發(fā)明所述的分離測(cè)定方法，包含以下步驟：
1)取任意光學(xué)純度的枸櫞酸馬羅匹坦或含任意光學(xué)純度的枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品適量，用一定量的正己烷與乙醇的體積比(v/v)為4:1的混合溶液或流動(dòng)相溶液作為稀釋劑溶解樣品；
2)設(shè)置儀器參數(shù)：流動(dòng)相的流速、檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱的柱箱溫度；
3)取一定量步驟1)的溶液，注入高效液相色譜儀，完成枸櫞酸馬羅匹坦與其光學(xué)異構(gòu)體的分離測(cè)定。
步驟1)所述的枸櫞酸馬羅匹坦可以是任意光學(xué)純度的，作為檢測(cè)使用的枸櫞酸馬羅匹坦可以采用cn1048492c所公開的方法制備。
在一些實(shí)施例中，步驟1)所述的流動(dòng)相溶液為正己烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺混合溶液；在一些實(shí)施例中，所述的正己烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實(shí)施例中，步驟1)所述的流動(dòng)相溶液為正庚烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺混合溶液；在一些實(shí)施例中，所述的正庚烷，異丙醇，甲醇以及二乙胺的體積比(v/v)為94:4.5:1.5:0.05；或者為95:3.75:1.25:0.05；或者為93:5.25:1.75:0.05。
在一些實(shí)施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品0.5mg至5mg；在另一些實(shí)施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品1mg至3mg；在某些實(shí)施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品2mg；在某些實(shí)施例中，步驟1)所述的稀釋劑中每1ml稀釋劑含枸櫞酸馬羅匹坦樣品5mg。
步驟2)所述流動(dòng)相的流速為0.3ml/min至2ml/min；在一些實(shí)施例中，流動(dòng)相的流速為0.8至1.1ml/min。所述檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm至300nm；在一些實(shí)施例中，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；所述色譜柱柱箱溫度為20℃至40℃；在一些實(shí)施例中，色譜柱柱箱溫度為35℃。
步驟3)所述樣品溶液進(jìn)樣量為2μl至20μl；在一些實(shí)施例中，所述樣品溶液進(jìn)樣量為3μl。
在一些實(shí)施例中，本發(fā)明所述的分離測(cè)定方法，包含以下步驟：
1)取枸櫞酸馬羅匹坦與其光學(xué)體的混合物或枸櫞酸馬羅匹坦或含枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品適量，用流動(dòng)相溶液或正己烷與乙醇的混合溶劑溶解樣品，并配制成每1ml含枸櫞酸馬羅匹坦0.5mg至5mg的樣品溶液；
2)設(shè)置流動(dòng)相的流速為0.3ml/min至2ml/min，流動(dòng)相的流速優(yōu)選為0.8至1.1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm至300nm，檢測(cè)波長(zhǎng)優(yōu)選為230nm，色譜柱柱箱溫度為20℃至40℃，優(yōu)選35℃；
3)取步驟1)的樣品溶液2μl至20μl，優(yōu)選3μl，注入高效液相色譜儀，完成枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)體的分離測(cè)定。
其中：
所采用的高效液相色譜儀為美國(guó)agilent1260型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站，
手性色譜柱選自chiralpakie或chiralpakic。
本發(fā)明采用以多糖衍生物為填料的手性色譜柱，以正己烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或者以正庚烷、異丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液為流動(dòng)相，可以將枸櫞酸馬羅匹坦與其光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行有效分離，從而可以準(zhǔn)確有效控制枸櫞酸馬羅匹坦的質(zhì)量。采用本發(fā)明所述的分離方法，分離檢測(cè)枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)體的時(shí)間在20分鐘以內(nèi)，本發(fā)明的方法能簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的分離檢測(cè)出枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體，分離度可達(dá)3.09-4.63。
具體實(shí)施方式
為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面進(jìn)一步披露一些非限制實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
本發(fā)明所使用的試劑均可以從市場(chǎng)上購(gòu)得或者可以通過(guò)本發(fā)明所描述的方法制備而得。
本發(fā)明中，mmol表示毫摩爾，h表示小時(shí)，g表示克，ml表示毫升。
本發(fā)明中使用的儀器與色譜柱的規(guī)格為：
美國(guó)agilent1260型高效液相色譜系統(tǒng)及工作站；
實(shí)施例1-實(shí)施例4：以chiralpakie手性色譜柱分離檢測(cè)枸櫞酸馬羅匹坦及其光學(xué)異構(gòu)體的方法。
枸櫞酸馬羅匹坦有兩個(gè)手性中心，有1個(gè)對(duì)映異構(gòu)體及2個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體，共3個(gè)光學(xué)異構(gòu)體。在實(shí)施例中，枸櫞酸馬羅匹坦簡(jiǎn)稱(s,s)-mrpt，其對(duì)映異構(gòu)體簡(jiǎn)稱(r,r)-mrpt，兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體分別簡(jiǎn)稱(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt。
實(shí)施例1
條件參數(shù)
紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流動(dòng)相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(95ml:3.75ml:1.25ml：0.05ml)為流動(dòng)相；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積為3μl。
實(shí)驗(yàn)步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對(duì)映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。分別采用(s,s)-mrpt，(r,r)-mrpt，(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt對(duì)照品對(duì)色譜峰進(jìn)行定位，圖1中保留時(shí)間為9.69分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；8.63分鐘的色譜峰為馬羅匹坦的對(duì)映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；11.34分鐘，12.99分鐘的色譜峰分別為馬羅匹坦的非對(duì)映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實(shí)施例2
條件參數(shù)
紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流動(dòng)相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml：0.05ml)為流動(dòng)相；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積為3μl。
實(shí)驗(yàn)步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對(duì)映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。圖2中保留時(shí)間為8.47分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；7.66分鐘的色譜峰為馬羅匹坦的對(duì)映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；9.70分鐘，10.99分鐘的色譜峰分別問(wèn)馬羅匹坦的非對(duì)映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實(shí)施例3
條件參數(shù)
紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流動(dòng)相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(93ml:5.25ml:1.75ml：0.05ml)為流動(dòng)相；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積為3μl。
實(shí)驗(yàn)步驟
稀釋劑：正己烷:乙醇＝80ml:20ml；取馬羅匹坦與非對(duì)映異構(gòu)體的混合物約20mg，置10ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。圖3中保留時(shí)間為8.21分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；7.46分鐘的色譜柱為馬羅匹坦的對(duì)映異構(gòu)體(r,r)-mrpt的色譜峰；9.28分鐘，10.43分鐘的色譜峰分別問(wèn)馬羅匹坦的非對(duì)映異構(gòu)體(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色譜峰。
實(shí)施例4
條件參數(shù)
紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流動(dòng)相：正己烷：異丙醇：甲醇溶液：二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml：0.05ml)為流動(dòng)相；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積為2μl。含枸櫞酸馬羅匹坦的制劑樣品如枸櫞酸馬羅匹坦普通片從zoetis購(gòu)買。
實(shí)驗(yàn)步驟
稀釋劑：甲醇；取枸櫞酸馬羅匹坦參比制劑0.5ml，置2ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，配制成5mg/ml溶液，搖勻，作為供試品溶液。
取供試品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖4，圖5。圖4為空白溶液譜圖，圖5中保留時(shí)間為7.39分鐘的色譜峰為(s,s)-mrpt的色譜峰；9.93分鐘的色譜峰分別為枸櫞酸馬羅匹坦的非對(duì)映異構(gòu)體(r,s)-mrpt的色譜峰。
本發(fā)明的方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。